Expression of protein p27 in various forms of seborrheic keratosis

Full Text

Себорейный кератоз (СК) является распространенной доброкачественной эпидермальной опухолью как у мужчин, так и у женщин, возникает чаще после 45-50 лет. Элементы СК представляют собой хорошо очерченные коричневатые пятна и/или бляшки, которые распространяются преимущественно вдоль кожных складок [1, 2]. Единой морфологической классификации заболевания нет, так как гистологические проявления СК разнообразны - в одном очаге могут присутствовать признаки нескольких гистологических типов [2]. В зарубежной литературе [3, 4] выделяют акантотический, гиперкератотический, аденоидный, раздраженный, клональный тип и меланоаканто- му. Диагностика СК в большинстве случаев не вызывает сомнений, тем не менее опухоль может имитировать другие новообразования кожи: вульгарные бородавки, лентиго, меланоцитарные невусы, актинический кератоз, болезнь Боуэна, плоскоклеточный рак как клинически, так и при патоморфологическом исследовании [3, 5]. Этиология СК неизвестна, хотя наследственность, повышенная инсоляция, соматические мутации третьего рецептора фактора роста фибробластов (FGFR3), а также вирус папилломы человека признаны факторами риска [1, 2, 6]. В настоящее время распространение получила теория старения кератиноцитов и нарушения апоптоза при СК. Исследования единичны, и причины изменений пролиферативных свойств клеток при СК неясны [7]. Кроме того, СК представляет собой интерес для изучения нарушений клеточного цикла, так как по существующим в настоящее время гистологическим критериям он выделен в группу доброкачественных опухолей [4]. Однако ряд иммуногистохимических признаков, характерных для злокачественных новообразований, клинические случаи злокачественной трансформации внутри очагов СК делают необходимым дальнейшее целенаправленное изучение патогенеза новообразования [6-8]. Основным механизмом нарушения пролиферации является дефект функции генов-супрессоров. Помимо высокой пролиферации рост опухоли связан с нарушением способности клетки к регуляции апоптоза. Наиболее изучаемые маркеры клеточного цикла, которые участвуют в контроле пролиферативного потенциала любой клетки, представляют р53, р21, р27 и р16. Определение их уровня экспрессии с помощью иммуногистохимических методов позволяет выявить степень нарушения пролиферации, которая неизменно сопровождается опухолевым ростом, способностью опухоли к инвазии и метастазированию [9]. p27 (Kipl) - ингибитор циклинзависимой киназы 1B, продукт гена-супрессора CDKN1B человека, член семейства белков Cip/Kip. Этот белок регулирует течение клеточного цикла, отвечает за его остановку в Gl-фазе путем подавления активности комплексов циклин А/циклин- зависимая киназа 2 и циклин Е/циклинзависимая киназа 2. р27-ядерно-цитоплазматический белок, его внутриклеточная локализация регулируется посттрансляцион- ными модификациями. Свои ингибиторные функции он выполняет в ядре, после его перемещения в цитоплазму становится возможным дальнейшее продвижение клетки по циклу [10, 11]. Гиперэкспрессия р27 изучена при злокачественных новообразованиях внутренних органов и является неблагоприятным прогностическим фактором в отношении опухолевой прогрессии [11]. При доброкачественных новообразованиях работ немного, и они содержат противоречивые данные. Так, в исследовании 10 раздраженных и акантотических СК А. Brueks и соавт. [7] обнаружена гиперэкспрессия только р27 наряду с отсутствием экспрессии р53, р16 и низким пролиферативным индексом, что позволило авторам говорить о ведущей роли р27 в контроле пролиферации клеток. Однако нам кажется целесообразным изучение р27 при всех типах СК, учитывая их морфологическое разнообразие. Цель исследования - установить взаимосвязь между уровнем экспрессии р27 и гистологическими формами СК. Материал и методы Под наблюдением находились 102 пациента с СК (62 женщины и 38 мужчин) в возрасте от 47 до 75 лет. У всех пациентов были множественные СК (более 15 элементов), которые располагались преимущественно на коже боковых поверхностей туловища, животе, на коже лица (рис. 1, 2). Хирургическому иссечению подвергали наиболее типичные элементы в виде плоских, умеренно пигментированных опухолей овальной формы, не более 2 см в диаметре, по одному элементу у каждого пациента. Окраску гистологических срезов проводили гематоксилином и эозином. По результатам гистологического исследования были отобраны по 10 образцов следующих гистологических типов СК: гиперкератотический, акантотический, аденоидный, Рис. 2. Множественные себорейные кератомы у пациентки 50 лет. Рис. 3. Диффузная ядерная экспрессия р27 и окраска ядерных мембран клеток себорейной кератомы (раздраженный тип). Иммунопероксидазный метод. Ув. 200. раздраженный и клональный. Для проведения иммуногистохимического (ИГХ) исследования использовали моноклональные антитела р27 в разведении 1:20 ("Novocastra Laboratories Ltd."). Результаты При ИГХ-исследовании экспрессия р27 носила выраженный характер в виде диффузного окрашивания ядер клеток во всех случаях раздраженного и аденоидного гистологических типов СК, а также в 4 случаях клонального типа. Наряду с окраской ядер отмечено специфическое окрашивание ядерных мембран клеток в виде четко очерченных колец и слабое окрашивание цитоплазмы. Подобный характер реакции был выражен преимущественно при раздраженном типе СК (рис. 3, 4). В некоторых препаратах количество клеток с целиком окрашенным ядром было значительно меньше клеток с окраской ядерных мембран. При гиперкератотическом, акантотическом и 6 случаях клонального типа СК положительная реакция с моноклональными антителами к р27 была слабой, регистрировались единичные, до 2 в поле зрения, окрашенные ядра клеток, расположение которых носило неравномерный очаговый характер (рис. 5). Обсуждение В результате проведенного исследования было выявлено нарушение экспрессии белка р27 при всех гистологических типах СК, что свидетельствует о его значительной роли в патогенезе заболевания. Повышенную Рис. 4. Отсутствие экспрессии р27 в клетках себорейной кератомы (акантотический тип). Иммунопероксидазный метод. Ув. 200. Рис. 5. Диффузная ядерная экспрессия р27 в клетках себорейной кератомы (раздраженный тип). Иммунопероксидазный метод. Ув. 200. экспрессию р27, находящегося в норме в наибольшем количестве в клетках в Gi-фазе [10, 11], в нашем исследовании обнаруживали при раздраженном, аденоидном и отдельных случаях клонального типах. Учитывая то, что р27 является «запасным тормозом» деления клеток [11], его значительное повышение при СК может свидетельствовать об отсутствии или недостаточном ответе первого звена регуляторов клеточного цикла - р53 и р16 на повышение пролиферативной активности клеток. Окраску ядерных мембран и прилегающих участков цитоплазмы рассматривали как снижение ядерного содержания р27 и выход его в цитоплазму. Нарушение баланса между количеством ядерного и цитоплазматического р27 является плохим прогностическим признаком и обнаруживается в основном в злокачественных новообразованиях кожи. По данным литературы [12], более 70% метастатических меланом содержат р27 в цитоплазме, тогда как меланомы без метастазов - в ядре. Появление значительного количества клеток с окраской ядерных мембран преимущественно при раздраженном и аденоидном типе СК свидетельствует о большем риске малигнизации, чем при других гистологических типах опухоли, где окраски мембран нет. Отрицательная реакция при ИГХ-исследовании или обнаружение единичных положительных ядер клеток опухоли при гиперкератотическом, акантотическом и клональном (в ряде случаев) СК могут быть расценены, с одной стороны, как отсутствие значимой пролиферативной активности клеток и не включения «запасного механизма» в виде р27, с другой стороны свидетельствовать о дефекте апоптоза, учитывая медленный, неуклонный рост элементов. Ни в одном из этих случаев не было обнаружено специфического окрашивания ядерных мембран, что свидетельствует о разных механизмах нарушений клеточного цикла при различных гистологических типах кератом. Таким образом, морфологические варианты СК имеют разный прогноз развития, роста и риска злокачественной трансформации. Выявленные особенности экспрессии белка р27 свидетельствуют о наличии характерных для каждого гистологического типа СК нарушений в регуляции клеточного цикла и пролиферативной активности клеток опухоли, что необходимо учитывать при комплексной оценке экспрессии других маркеров клеточного цикла при СК. Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

About the authors

Alexandra K. Aleksandrova

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: veter278@rambler.ru
Department of Pathological Anatomy; MD, PhD Moscow, 119991, Russian Federation

G. I Sukolin

Polyclinic №1 of the Office of the President of the Russian Federation

Moscow, 121359, Russian Federation

V. A Smolynnikova

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Department of Pathological Anatomy Moscow, 119991, Russian Federation

References

Supplementary files