MOLECULAR GENETIC IDENTIFICATION OF T-CELL CLONALITY OF LYMPHOID CELLS

Full Text

Современная диагностика лимфом кожи осуществляется комплексно с использованием гистологического, иммунофенотипического и молекулярно-генетического методов исследования [1—3]. Последний не только повышает точность диагностики лимфом кожи на 5—10%, может применяться для их раннего выявления [1, 3], но и весьма удобен, так как не требует больших временных затрат и может проводиться с использованием микробиоптатов (пункционная биопсия диаметром не более 3 мм) кожи и ДНК из парафиновых блоков (архивный, а не только свежий биопсийный материал) [2, 3]. С другой стороны, следует учитывать, что выявляемая с его помощью моноклональность лимфоидных клеток еще не указывает на наличие у пациента лимфомы (как, например, это наблюдается при лимфоматоидном папуле-зе, красной волчанке или системной склеродермии) [2] и для установления такого диагноза обязательно нужна гистологическая верификация. В более ранних работах мы продемонстрировали высокую информативность в диагностике и диф ференциальной диагностике Т-клеточных лимфом кожи (Т-КЛК) одного из методов полимеразной цепной реакции (PCR) — метода конформационного одноцепочечного полиморфизма (SSCP) на основе определения Т-клеточной клональности лимфоидных клеток по генам ү-цепи Т-клеточного рецептора (TCRy) [2]. Цель исследования — сравнительная оценка результатов молекулярно-генетического определения Т-клеточной клональности лимфоидных клеток по генам TCRy с помощью методов SSCP и фраг-ментного анализа (FA) со стандартизированными PCR-праймерами по протоколу BiOmeD-2 BMH4-CT98-3936 при дифференциальной диагностике Т-КЛК с В-клеточной лимфомой кожи (В-КЛК), клинически сходными с ними доброкачественными дерматозами (крупно- и мелкобляшечным парапсориазом — КБП и МБП), псевдолимфомой кожи (ПЛК) и хроническими доброкачественными дерматозами (ХДД), такими как атопический дерматит, экзема, псориаз. Клинические признаки и предполагаемый диагноз у обследуемых больных (n = 131) Таблица 1 Клинические признаки, выявленные у обследуемых больных Количество пациентов Диагноз, предполагаемый на основании клинической картины абс. % Т-КЛК В-КЛК парапсориаз ПЛК ХДД Пятна эритематозно-сквамозные 72 55 53 2 15 0 15 Бляшки 42 35 45 2 15 4 14 Узлы 15 13 3 7 0 6 0 Пойкилодермия 49 3 11 0 1 0 1 Полилимфаденопатия 30 25 23 6 1 0 5 Зуд 81 68 45 8 5 7 11 Сухость кожи 48 39 38 3 3 0 7 Результаты молекулярно-генетического обследования при гистологически с ними заболеваниях Т аблица 2 верифицированных Т-КЛК, В-КЛК и сравниваемых Количество Диагноз по данным гистологического исследования PCR-SSCP-TCRy PCR-ФА-TCRү PCR-IgH больных (n = 131) моно поли моно поли моно 99 Т-КЛК (n = 49) 49 (100%) 0 49 (100%) 0 - КБП (n = 14) 0 14 1(7%)* 13 - МБП (n = 5) 0 5 (100%) 0 5 (100%) - ПЛК (n = 7) 0 7 (100%) 0 7 (100%) - ХДД (n = 24) 0 24 (100%) 0 24 (100%) - 9 В-КЛК (n = 9) 0 0 0 0 9 (100%) 23 Результат исследования не позволяет достоверно верифицировать диагноз 12 (52%) 0% 7 (31%) 4(17%) - 10 Группа контроля 0 10 (100%) 0 10 (100%) - Примечание. *У 1 больного КБП через 3 мес после выявления моноклональности методом FA-TCRy также выявлена Т-КЛК с помощью патоморфологического метода исследования. Результаты обследования больных 1-й группы Таблица 3 № наблюдения Пациент Возраст, годы Пол Клиническая картина Гистологический диагноз PCR-SSCP-TCRy* PCR-FA-TCRy** 1 С. 44 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 2 М. 56 М. Пятна Т-КЛК 0 + 3 П. 52 Ж. Эритродермия Т-КЛК 0 + 4 И. 57 М. Пятна Т-КЛК 0 + 5 Х. 37 М. Пятна, бляшки Т-КЛК 0 + 6 М. 72 М. Пятна, бляшки Т-КЛК 0 + 7 З. 55 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 8 М. 72 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 9 С. 55 Ж. Эритродермия Т-КЛК 0 + 10 Т. 36 Ж. Пятна Т-КЛК 0 + 11 В. 65 Ж. Пятна Дерматит 0 - Примечание. Здесь и в табл. 4: *праймеры опубликованы в работе Т. Greiner [4]; **— праймеры по протоколу BIOMED-2 [5]; плюс — моноклональный результат, минус — поликлональный результат. 5 РОССИЙСКИЙ ЖУРНАЛ КОЖНЫХ И ВЕНЕРИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ Результаты обследования больных 2-й группы Таблица 4 № наблюдения Больной Возраст, годы Пол Клиническая картина Гистологический диагноз PCR-SSCP-TCRy* PCR-FA-TCRy** 1 Ц. 56 М. Эритродермия Т-КЛК + + 2 З. 49 Ж. Пятна Т-КЛК + + 3 Т. 69 Ж. Эритродермия Т-КЛК + + 4 И. 55 М. Пятна Т-КЛК + + 5 И. 37 М. Пятна, бляшки Т-КЛК - + 6 Т. 48 М. Пятна, бляшки Т-КЛК - + 7 Л. 55 Ж. Эритродермия Дерматит - + 8 Т. 58 Ж. Эритродермия Дерматит - + 9 С. 77 Ж. Эритродермия Дерматит - - 10 Х. 56 Ж. Пятна Дерматит - - 11 Ж. 65 М. Пятна Дерматит - - 12 И. 66 Ж. Пятна Дерматит - - Материалы и методы Обследован 131 пациент (55 мужчин и 76 женщин) в возрасте от 27 до 87 лет (средний возраст 57 ± 4,9 года) с патологическим процессом, требующим отличия Т-КЛК от других, сходных по клиническим проявлениям заболеваний. Объектом исследования являлись биоптаты кожи из очагов поражения всех обледуемых пациентов. Контролем служили 10 биоптатов кожи здоровых лиц. На выраженное клиническое сходство с Т-КЛК сравниваемых заболеваний, таких как В-КЛК, парапсориаз, ПЛК и ХДД, указывают данные табл. 1. Сходство клинических признаков требовало для установления диагноза Т-КЛК проведения гистологического исследования биоптата пораженной кожи (см. табл. 1), на основании которого он был подтвержден у 49 больных, у 23 было высказано лишь подозрение на Т-КЛК, у 9 — диагностирована В-КЛК, у 14 — КБП, у 5 — МБП, у 7 — ПЛК, у 24 — ХДД. Результаты и обсуждение При исследования биоптатов кожи методами SSCP и FA по генам TCRy (FA-TCRy и SSCP-TCRy) у пациентов с гистологически верифицированным диагнозом получены статистически одинаковые результаты при Т-КЛК (срок заболевания варьировал от 3 до 25 лет, в среднем составил 6,3 ± 4,6 года), В-КЛК, ХДД и в группе контроля (табл. 2). Оставшиеся 23 пациента с клиническим подозрением на Т-КЛК и без гистологической верификации диагноза были разделены на 2 группы (1-я группа — 11 пациентов, средний срок заболевания 8,3 ± 5,1 мес, 2-я группа — 12 пациентов, средний срок заболевания 10,7 ± 5,7 мес) и обследованы с помощью PCR-методов FA и SSCP по генам TCRy. Результаты молекулярно-генетического исследования биоптатов кожи больных 1-й группы с помощью методов FA-TCRy и SSCP-TCRy представлены в табл. 3. Как видно из табл. 3, при исследовании методом FA-TCRy моноклональность выявлена в наблюдениях № 1—10 в сроки заболевания от 6 до 18 мес (в среднем 11,1 ± 4,6 мес). Гистологическая верификация диагноза Т-КЛК была осуществлена в более поздние сроки болезни — от 7 до 24,5 мес (в среднем 14,6 ± 5,6 мес) соответственно. Результаты молекулярно-генетического исследования биоптатов кожи больных 2-й группы с помо щью методов FA-TCRy и SSCP-TCRy представлены в табл. 4, из которой видно, что моноклональность лимфоидных клеток выявили в наблюдениях № 1—4 в сроки заболевания от 3,5 до 23 мес (в среднем 9,6 ± 7,9 мес; p > 0,05). Гистологический диагноз Т-КЛК во 2-й группе был установлен позже — в сроки болезни 9, 11, 17, 31 мес соответственно (в среднем 17 ± 8,6 мес). Таким образом, в диагностике и дифференциальной диагностике Т-КЛК оба метода (PCR-SSCP-TCRy и PCR-ФА-TCRy) оказались одинаково информативными в поздние (от 3 до 25 лет) сроки болезни; в более ранние сроки Т-КЛК метод FA с праймерами по протоколу BIOMED-2 оказался существенно чувствительнее (64 и 33% соответственно), что позволяет с большой достоверностью рекомендовать метод PCR-FA-TCRy для проведения ранней диагностики лимфом кожи.

About the authors

V. A Molochkov

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute; I.M.Sechenov Moscow State Medical University

A. M Kovrigina

Hematology Research Center, Moscow

Yu. V. Sidorova

I.M.Sechenov Moscow State Medical University

G. V. Menshchikova

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute

A. A Groznova

I.M.Sechenov Moscow State Medical University

Email: anna_groznova@list.ru

A. V. Fedorovskaya

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute

References

Supplementary files