MOLECULAR GENETIC IDENTIFICATION OF T-CELL CLONALITY OF LYMPHOID CELLS

全文:

Современная диагностика лимфом кожи осуществляется комплексно с использованием гистологического, иммунофенотипического и молекулярно-генетического методов исследования [1—3]. Последний не только повышает точность диагностики лимфом кожи на 5—10%, может применяться для их раннего выявления [1, 3], но и весьма удобен, так как не требует больших временных затрат и может проводиться с использованием микробиоптатов (пункционная биопсия диаметром не более 3 мм) кожи и ДНК из парафиновых блоков (архивный, а не только свежий биопсийный материал) [2, 3]. С другой стороны, следует учитывать, что выявляемая с его помощью моноклональность лимфоидных клеток еще не указывает на наличие у пациента лимфомы (как, например, это наблюдается при лимфоматоидном папуле-зе, красной волчанке или системной склеродермии) [2] и для установления такого диагноза обязательно нужна гистологическая верификация. В более ранних работах мы продемонстрировали высокую информативность в диагностике и диф ференциальной диагностике Т-клеточных лимфом кожи (Т-КЛК) одного из методов полимеразной цепной реакции (PCR) — метода конформационного одноцепочечного полиморфизма (SSCP) на основе определения Т-клеточной клональности лимфоидных клеток по генам ү-цепи Т-клеточного рецептора (TCRy) [2]. Цель исследования — сравнительная оценка результатов молекулярно-генетического определения Т-клеточной клональности лимфоидных клеток по генам TCRy с помощью методов SSCP и фраг-ментного анализа (FA) со стандартизированными PCR-праймерами по протоколу BiOmeD-2 BMH4-CT98-3936 при дифференциальной диагностике Т-КЛК с В-клеточной лимфомой кожи (В-КЛК), клинически сходными с ними доброкачественными дерматозами (крупно- и мелкобляшечным парапсориазом — КБП и МБП), псевдолимфомой кожи (ПЛК) и хроническими доброкачественными дерматозами (ХДД), такими как атопический дерматит, экзема, псориаз. Клинические признаки и предполагаемый диагноз у обследуемых больных (n = 131) Таблица 1 Клинические признаки, выявленные у обследуемых больных Количество пациентов Диагноз, предполагаемый на основании клинической картины абс. % Т-КЛК В-КЛК парапсориаз ПЛК ХДД Пятна эритематозно-сквамозные 72 55 53 2 15 0 15 Бляшки 42 35 45 2 15 4 14 Узлы 15 13 3 7 0 6 0 Пойкилодермия 49 3 11 0 1 0 1 Полилимфаденопатия 30 25 23 6 1 0 5 Зуд 81 68 45 8 5 7 11 Сухость кожи 48 39 38 3 3 0 7 Результаты молекулярно-генетического обследования при гистологически с ними заболеваниях Т аблица 2 верифицированных Т-КЛК, В-КЛК и сравниваемых Количество Диагноз по данным гистологического исследования PCR-SSCP-TCRy PCR-ФА-TCRү PCR-IgH больных (n = 131) моно поли моно поли моно 99 Т-КЛК (n = 49) 49 (100%) 0 49 (100%) 0 - КБП (n = 14) 0 14 1(7%)* 13 - МБП (n = 5) 0 5 (100%) 0 5 (100%) - ПЛК (n = 7) 0 7 (100%) 0 7 (100%) - ХДД (n = 24) 0 24 (100%) 0 24 (100%) - 9 В-КЛК (n = 9) 0 0 0 0 9 (100%) 23 Результат исследования не позволяет достоверно верифицировать диагноз 12 (52%) 0% 7 (31%) 4(17%) - 10 Группа контроля 0 10 (100%) 0 10 (100%) - Примечание. *У 1 больного КБП через 3 мес после выявления моноклональности методом FA-TCRy также выявлена Т-КЛК с помощью патоморфологического метода исследования. Результаты обследования больных 1-й группы Таблица 3 № наблюдения Пациент Возраст, годы Пол Клиническая картина Гистологический диагноз PCR-SSCP-TCRy* PCR-FA-TCRy** 1 С. 44 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 2 М. 56 М. Пятна Т-КЛК 0 + 3 П. 52 Ж. Эритродермия Т-КЛК 0 + 4 И. 57 М. Пятна Т-КЛК 0 + 5 Х. 37 М. Пятна, бляшки Т-КЛК 0 + 6 М. 72 М. Пятна, бляшки Т-КЛК 0 + 7 З. 55 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 8 М. 72 М. Эритродермия Т-КЛК 0 + 9 С. 55 Ж. Эритродермия Т-КЛК 0 + 10 Т. 36 Ж. Пятна Т-КЛК 0 + 11 В. 65 Ж. Пятна Дерматит 0 - Примечание. Здесь и в табл. 4: *праймеры опубликованы в работе Т. Greiner [4]; **— праймеры по протоколу BIOMED-2 [5]; плюс — моноклональный результат, минус — поликлональный результат. 5 РОССИЙСКИЙ ЖУРНАЛ КОЖНЫХ И ВЕНЕРИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ Результаты обследования больных 2-й группы Таблица 4 № наблюдения Больной Возраст, годы Пол Клиническая картина Гистологический диагноз PCR-SSCP-TCRy* PCR-FA-TCRy** 1 Ц. 56 М. Эритродермия Т-КЛК + + 2 З. 49 Ж. Пятна Т-КЛК + + 3 Т. 69 Ж. Эритродермия Т-КЛК + + 4 И. 55 М. Пятна Т-КЛК + + 5 И. 37 М. Пятна, бляшки Т-КЛК - + 6 Т. 48 М. Пятна, бляшки Т-КЛК - + 7 Л. 55 Ж. Эритродермия Дерматит - + 8 Т. 58 Ж. Эритродермия Дерматит - + 9 С. 77 Ж. Эритродермия Дерматит - - 10 Х. 56 Ж. Пятна Дерматит - - 11 Ж. 65 М. Пятна Дерматит - - 12 И. 66 Ж. Пятна Дерматит - - Материалы и методы Обследован 131 пациент (55 мужчин и 76 женщин) в возрасте от 27 до 87 лет (средний возраст 57 ± 4,9 года) с патологическим процессом, требующим отличия Т-КЛК от других, сходных по клиническим проявлениям заболеваний. Объектом исследования являлись биоптаты кожи из очагов поражения всех обледуемых пациентов. Контролем служили 10 биоптатов кожи здоровых лиц. На выраженное клиническое сходство с Т-КЛК сравниваемых заболеваний, таких как В-КЛК, парапсориаз, ПЛК и ХДД, указывают данные табл. 1. Сходство клинических признаков требовало для установления диагноза Т-КЛК проведения гистологического исследования биоптата пораженной кожи (см. табл. 1), на основании которого он был подтвержден у 49 больных, у 23 было высказано лишь подозрение на Т-КЛК, у 9 — диагностирована В-КЛК, у 14 — КБП, у 5 — МБП, у 7 — ПЛК, у 24 — ХДД. Результаты и обсуждение При исследования биоптатов кожи методами SSCP и FA по генам TCRy (FA-TCRy и SSCP-TCRy) у пациентов с гистологически верифицированным диагнозом получены статистически одинаковые результаты при Т-КЛК (срок заболевания варьировал от 3 до 25 лет, в среднем составил 6,3 ± 4,6 года), В-КЛК, ХДД и в группе контроля (табл. 2). Оставшиеся 23 пациента с клиническим подозрением на Т-КЛК и без гистологической верификации диагноза были разделены на 2 группы (1-я группа — 11 пациентов, средний срок заболевания 8,3 ± 5,1 мес, 2-я группа — 12 пациентов, средний срок заболевания 10,7 ± 5,7 мес) и обследованы с помощью PCR-методов FA и SSCP по генам TCRy. Результаты молекулярно-генетического исследования биоптатов кожи больных 1-й группы с помощью методов FA-TCRy и SSCP-TCRy представлены в табл. 3. Как видно из табл. 3, при исследовании методом FA-TCRy моноклональность выявлена в наблюдениях № 1—10 в сроки заболевания от 6 до 18 мес (в среднем 11,1 ± 4,6 мес). Гистологическая верификация диагноза Т-КЛК была осуществлена в более поздние сроки болезни — от 7 до 24,5 мес (в среднем 14,6 ± 5,6 мес) соответственно. Результаты молекулярно-генетического исследования биоптатов кожи больных 2-й группы с помо щью методов FA-TCRy и SSCP-TCRy представлены в табл. 4, из которой видно, что моноклональность лимфоидных клеток выявили в наблюдениях № 1—4 в сроки заболевания от 3,5 до 23 мес (в среднем 9,6 ± 7,9 мес; p > 0,05). Гистологический диагноз Т-КЛК во 2-й группе был установлен позже — в сроки болезни 9, 11, 17, 31 мес соответственно (в среднем 17 ± 8,6 мес). Таким образом, в диагностике и дифференциальной диагностике Т-КЛК оба метода (PCR-SSCP-TCRy и PCR-ФА-TCRy) оказались одинаково информативными в поздние (от 3 до 25 лет) сроки болезни; в более ранние сроки Т-КЛК метод FA с праймерами по протоколу BIOMED-2 оказался существенно чувствительнее (64 и 33% соответственно), что позволяет с большой достоверностью рекомендовать метод PCR-FA-TCRy для проведения ранней диагностики лимфом кожи.

作者简介

V. Molochkov

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute; I.M.Sechenov Moscow State Medical University

A. Kovrigina

Hematology Research Center, Moscow

Yu. Sidorova

I.M.Sechenov Moscow State Medical University

G. Menshchikova

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute

A. Groznova

I.M.Sechenov Moscow State Medical University

Email: anna_groznova@list.ru

A. Fedorovskaya

M.V. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute

参考

补充文件