Evaluation of subpopulations of T lymphocytes in psoriasis patients during therapy

全文:

Псориаз – хроническое рецидивирующее аутовоспалительное заболевание кожи, которое встречается примерно у 2% населения [1]. Высокая частота заболеваемости псориазом во всем мире среди лиц трудоспособного возраста обусловливает повышенный интерес исследователей к данной патологии. Тяжелое течение дерматоза (псориатический артрит, псориатическая эритродермия, пустулезный псориаз) нередко лишает возможности заниматься профессиональной деятельностью, приводит к длительной нетрудоспособности, а порой и к инвалидизации, что отрицательным образом сказывается на качестве жизни пациента. Помимо поражения суставов заболевание имеет ряд других коморбидностей (сердечно-сосудистые нарушения, метаболический синдром, болезнь Крона и др.) [2, 3].

В последние десятилетия удалось достичь значительных успехов в понимании сложных механизмов, провоцирующих запуск и поддерживающих течение псориаза: в частности, были открыты субпопуляции Т-клеток, играющие различную роль в развитии воспаления кожного процесса. Отдельные популяции выступают в качестве инициирующих агентов, другие – в качестве регулируемых клеток-эффекторов, усиливающих воспаление и, возможно, опосредующих выраженность клинических проявлений [4, 5].

Актуальной задачей современной медицины является изучение молекулярных механизмов запуска заболевания, обнаружение новых терапевтических мишеней, определение диагностических и прогностических маркеров течения псориаза.

Цель исследования – анализ характера иммунного реагирования на различные виды терапии псориаза на основании результатов изучения основных субпопуляций Т-лимфоцитов, их уровня, рецепторного фенотипа и клинической значимости, а также изменения содержания цитокинов в сыворотке крови больных.

Материал и методы

В исследовании приняли участие 68 больных (30 мужчин и 38 женщин) в возрасте от 18 до 60 лет с верифицированным диагнозом псориаза и наличием прогрессирующей или стационарной стадии. Вульгарной формой псориаза страдали 52, экссудативной – 16 пациентов. У подавляющего большинства испытуемых патологический процесс носил распространенный характер поражения. Средний возраст больных составил 41,2 ± 16,3 года, средний возраст начала заболевания – 34,1 ± 10,5 года.

В качестве абсолютного контроля была сформирована группа здоровых добровольцев в количестве 22 человек.

Пациенты были проинформированы о целях и задачах исследования, после чего подписывали бланк-форму информированного согласия на участие.

Критериями включения были пациенты с площадью поражения кожного покрова более 50%, не принимающие на момент взятия крови системную иммуносупрессивную терапию в течение 2 мес. К исследованию не допускались больные с наличием тяжелой сопутствующей соматической патологии в стадии декомпенсации; имеющие онкологические заболевания; имеющие инфекционные заболевания (сифилис, ВИЧ, гепатит В и С); с диагнозом туберкулеза; с диагнозом эпилепсии; пациенты, страдающие алкоголизмом, наркоманией и любыми психическими расстройствами; в периоде беременности или лактации. Критериями исключения являлись желание пациента прекратить участие в исследовании или несоблюдение им режима, назначенной схемы обследования и лечения. Всем участникам исследования проводилась стандартная программа клинико-лабораторного контроля для данного заболевания, определяли индекс распространенности и тяжести псориаза (PASI, Psoriasis Area and Severity Index), дерматологический индекс качества жизни (ДИКЖ).

В зависимости от варианта лечения больные были распределены на две группы: в первой группе (32 больных) проводили селективную фототерапию, во второй (36 больных) – лечение метотрексатом совместно с селективной фототерапией. До лечения, через 3 и 6 мес от его начала анализировали следующие параметры: содержание в периферической крови субпопуляций Т-лимфоцитов (CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺) и Treg (регуляторных Т-лимфоцитов) с помощью метода проточной цитометрии с использованием моноклональных антител, концентрации интерлейкинов (IL-1β, IL-2, IL-6), фактора некроза опухоли альфа (tumor necrosis factor, TNFα), интерферона гамма (IFNγ) в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. Статистическую значимость различий результатов исследования оценивали с помощью программ Microsoft Excel 13, SPSS Statistics 17.0, Mann–Whitney U Test Calculator.

Результаты и обсуждение

Оценка тяжести и распространенности по индексу PASI до начала терапии свидетельствовала, что у всех больных, включенных в исследование, был псориаз средней и тяжелой степени. При этом значимых межгрупповых различий не выявлено. Определение значения ДИКЖ до начала лечения значимых межгрупповых различий также не показало, однако качество жизни у данных больных было существенно снижено. Показатели PASI и ДИКЖ в группах до начала лечения представлены в табл. 1.

 

Таблица 1

Показатели PASI и ДИКЖ в группах больных до начала лечения (M ± m)

Показатель	1-я группа, n = 32	2-я группа, n = 36
PASI	19,4 ± 2,4	25,7 ± 3,7
ДИКЖ	14,0 ± 3,3	18,5 ± 2,4

Примечание. PASI (от Psoriasis Area and Severity Index) – индекс распространенности и тяжести псориаза; ДИКЖ – дерматологический индекс качества жизни.

 

Изучение иммунного статуса больных псориазом до лечения по сравнению с группой контроля выявило ряд изменений: повышение абсолютного и относительного содержания CD8-цитотоксических Т-лимфоцитов (табл. 2).

 

Таблица 2

Иммунологические показатели больных псориазом до лечения (M ± m)

Показатель	Здоровые доноры, n = 22	Больные псориазом, n = 68
CD3+, % Т-лимфоциты	74,2 ± 8,5	78,7 ± 6,2
CD3+, абс., ∙103/мкл	1,21 ± 0,22	1,34 ± 0,16
CD4+, % Т-лимфоциты	47,2 ± 2,9	45,6 ± 6,2
CD4+, абс., ∙103/мкл	0,78 ± 0,06	0,90 ± 0,11
CD8+, % цитотоксические Т-лимфоциты	24,9 ± 3,2	34,0 ± 2,8*
CD8+, абс., ∙103/мкл	0,40 ± 0,05	0,50 ± 0,05
Treg, %	6,79 ± 1,15	3,80 ± 0,46*
Treg, абс., ∙103/мкл	0,111 ± 0,019	0,062 ± 0,008*

Примечание. Здесь и в табл. 3, 4: * – p < 0,05 – различия статистически значимы при сравнении с группой здоровых доноров (контрольной группой).

 

Изучение уровня цитокинов до лечения у больных псориазом по сравнению с группой контроля выявило повышение концентрации IL-1β, IL-2, IL-6, TNFα и снижение показателей IFNγ (табл. 3).

 

Таблица 3

Показатели цитокинов больных псориазом (M ± m)

Показатель	Здоровые доноры, n = 22	Больные псориазом, n = 68
IL-1β, пг/мл	5,7 ± 1,2	19,3 ± 2,0*
IL-2, пг/мл	16,8 ± 3,4	41,4 ± 6,1*
IL-6, пг/мл	19,5 ± 4,1	37,4 ± 7,5*
TNFα, пг/мл	6,8 ± 1,9	21,3 ± 2,7*
IFNγ, пг/мл	56,8 ± 7,3	29,7 ± 4,4*

 

Анализ динамики показателя PASI в процессе лечения в группах больных псориазом показал, что если до начала терапии различий не отмечено, то спустя 6, 12 и 24 нед более выраженное уменьшение данного параметра было у больных второй группы (рис. 1). Динамика показателя ДИКЖ также показала более выраженное снижение именно во второй группе (рис. 2).

 

Рис. 1. Динамика показателя PASI в процессе лечения больных псориазом.

 

Рис. 2. Динамика показателя ДИКЖ в процессе лечения больных псориазом.

 

В ходе проводимой терапии через 24 нед после начала лечения наблюдалась следующая динамика иммунологических показателей (табл. 4):

 

Таблица 4

Субпопуляции иммунокомпетентных клеток у больных псориазом через 24 нед после от начала лечения (M ± m)

Показатель	Группа контроля, n = 22	1-я группа, n = 32	2-я группа, n = 36
Treg, %	6,79 ± 1,15	3,42 ± 0,28*	5,06 ± 1,14
CD3+, %	74,2 ± 8,5	75,2 ± 4,4	76,4 ± 4,1
CD4+, %	47,2 ± 2,9	43,1 ± 4,4	42,7 ± 4,8
CD8+, %	24,9 ± 3,2	32,5 ± 1,6*	25,2 ± 4,7

 

• в 1-й группе больных относительное содержание регуляторных Т-лимфоцитов оставалось сниженным, в то время как у пациентов 2-й группы значения данного показателя повысились и значимо не отличались от контрольных величин;
• содержание CD3-лимфоцитов в периферической крови существенно не различалось в 1-й, 2-й группах и группе контроля;
• уровень CD4-лимфоцитов (Т-хелперов) во всех группах больных псориазом был несколько ниже, чем в контрольной группе, но значимых различий при этом не выявлено;
• относительное количество CD8-клеток (цитотоксических Т-лимфоцитов) в 1-й группе оставалось статистически значимо повышенным, в то время как у больных 2-й группы после проведенного лечения оно снизилось и значимо не отличалось от контроля.

 

Таблица 5

Взаимосвязь между иммунологическими показателями и клиническими проявлениями тяжести псориаза (коэффициенты корреляции Спирмена, R*)

Параметр	PASI	ДИКЖ
Treg, %	-0,35	-0,38
CD3+, %	-0,30	–
CD4+, % Т-хелперы	-0,32	-0,35
CD8+, % цитотоксические Т-лимфоциты	0,42	0,35
IL-1β, пг/мл	0,45	–
IL-2, пг/мл	0,52	0,44
IL-6, пг/мл	0,37	–
TNFα, пг/мл	0,57	0,32
IFNγ	-0,46	–

Примечание: * p < 0,05 – представлены только значимые коэффициенты корреляции.

 

В табл. 5 представлены коэффициенты корреляции Спирмена умеренной силы между уровнем активности заболевания по показателю PASI и следующими иммунологическими параметрами: относительным количеством T-регуляторных лимфоцитов (R = -0,38), показателями CD3⁺ в периферической крови (R = -0,30), CD4⁺ (Т-хелперов) (R = -0,32), CD8⁺ цитотоксических Т-лимфоцитов (R = 0,42). Также выявлено наличие ряда корреляций между значениями активности псориаза (PASI) и концентрациями всех изученных цитокинов у обследованных больных: IL-1β (R = -0,45), IL-2 (R = 0,52), IL-6 (R = 0,37), TNFα (R = 0,57), а также IFNγ (R = -0,46).

Также расчеты показали наличие ряда значимых корреляционных связей между показателя качества жизни (ДИКЖ) и иммунологическими характеристиками: содержанием Treg клеток (R = -0,38), показателями CD3-лимфоцитов (R = -0,30), содержанием в периферической крови CD4 Т-хелперов (R = -0,35), относительным содержанием CD8-цитотоксических Т-лимфоцитов (R = 0,35).

Обнаружено наличие значимых отрицательных корреляций между показателями качества жизни больных псориазом и содержанием IL-2 (R = 0,44), а также TNFα (R = -0,32).

Результаты проведенного анализа свидетельствуют о наличии ряда значимых корреляционных связей умеренной силы между показателями активности процесса у больных псориазом, с одной стороны, и иммунологическими характеристиками (в частности, показателями содержания различных субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови) больных псориазом – с другой.

Таким образом, выявленная динамика показателей иммунного статуса в процессе лечения больных псориазом свидетельствует о тенденции к восстановлению нарушенных функций иммунной системы у пациентов, которая проявляется через 3–6 мес от начала лечения нормализацией баланса клеточных субпопуляций лимфоцитов, в частности Т-лимфоцитов. При этом наиболее эффективным оказалось комбинированное применение селективной фототерапии и метотрексата.

作者简介

N. Kochergin

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)

Email: paramonov_aleksey@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7136-4053

Department of dermatology and venereology

俄罗斯联邦, Moscow, 119991

A. Paramonov

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)

编辑信件的主要联系方式.
Email: paramonov_aleksey@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0441-314X

MD, postgraduate of Department of dermatology and venereology

俄罗斯联邦, Moscow, 119991

L. Kayumova

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)

Email: paramonov_aleksey@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0301-737X

Department of dermatology and venereology

俄罗斯联邦, Moscow, 119991

参考

补充文件