Immune aspects of segmentary and nonsegmentary vitiligo

Full Text

Пристальное внимание дерматологов к витилиго объясняется широкой распространенностью этой патологии, а также отсутствием однозначно принятой теории ее возникновения и развития. Несмотря на уже известные многочисленные этиологические факторы, не выяснены их взаимосвязи и роль в механизме развития витилиго [1]. До настоящего времени в литературе нет общепринятой классификации витилиго на основе новых научных данных, которая обеспечила бы сопоставимость дифференциально-диагностических критериев и клинических форм заболевания [2]. В настоящее время в зарубежной литературе выделяют два основных подтипа витилиго: сегментарное (СВ) и несегментарное витилиго (НСВ), в основу которых положен принцип выделения индивидуального клинического течения. Высказывают предположения, что оба типа различаются отдельными механизмами развития, описанными как аутоиммунное и адренергическое витилиго [3]. Возникновение очагов депигментации рассматривают как результат неадекватной активации клеточного звена иммунитета в виде выработки аутоантител как к мелано- цитам, так и к меланинсодержащим структурам [4]. Установлены изменения как общего числа Т-лимфоцитов, так и их субпопуляций, в дальнейшем способствующие выработке цитокинов [5, 6]. Систематизированы особенности иммунного ответа у больных витилиго в зависимости от течения, стадии и активности витилигинозного процесса, однако единой точки зрения на значение иммунологических сдвигов при различных клинических формах до сих пор не выработано, отсутствуют дифференцированные схемы лечения заболевания. По мнению ряда авторов [2, 3], основная этиопатоге- нетическая роль в развитии НСВ отводится аутоиммунной теории. Недавно появились сведения об увеличении количества Т-клеток в крови и в поврежденной коже у больных СВ, что также дает основание предполагать значение иммунологических механизмов в возникновении этой формы витилиго [2]. При изучении субпопуляций Т-лимфоцитов у больных СВ I. Lin и соавт. [7] обнаружили значительное снижение концентрации Т-хелперов (CD4+) и увеличение зрелых Т-клеток (CD3+ CD19) и натуральных киллеров (CD16+ CD56+) по сравнению с аналогичными показателями здоровой группы. Также у них было отмечено снижение соотношения показателей Т-хелперы/Т-индукторы (CD3+ CD4+) и Т-супрессоры/Т- цитотоксические (CD3+ CD8+). При сравнении двух клинических форм витилиго установлено, что у больных НСВ сильнее выражен дефицит в Т-системе иммунитета на фоне снижения Т-супрессорной активности, что свидетельствует о более глубоких нарушениях и напряженности в работе системы иммунитета [8]. Аналогичные результаты были получены и в исследованиях R. Halder и соавт. [9], N. Mozzanica [10]. Оценка иммунорегуляторного индекса, свидетельствующего о неадекватности иммунной реакции, показала значительное его снижение у больных витилиго, но при этом различий в группах больных СВ и НСВ не наблюдалось [11]. Таким образом, имеющиеся сведения по иммунопатологическим компонентам развития СВ и НСВ ограничены и противоречивы. Цель исследования - проведение расширенного анализа иммунологического статуса больных СВ и НСВ. Материалы и методы Обследовано 40 больных с двумя клиническими формами витилиго в возрасте от 18 до 56 лет, из них 20 больных СВ (13 женщин и 7 мужчин) и 20 - НСВ (11 женщин и 9 мужчин). Контрольную группу составили 20 здоровых людей, схожих по полу и возрасту с обследованными больными. Большинство (80%) больных СВ дебют заболевания имели в возрасте до 30 лет, в то время как у больных НСВ начало заболевания почти с одинаковой частотой констатировано во всех возрастных группах. У больных СВ депигментированные пятна имели неправильные очертания, располагались асимметрично в зонах иннервации одного или нескольких спинно-мозговых сегментов. У больных НСВ почти во всех случаях наблюдалось симметричное расположение патологических очагов, и только у 3 больных процесс имел асимметричный характер. Пятна местами сливались. Из общего числа больных НСВ у 65% отмечалась акрофациальная форма (с поражением дистальных отделов конечностей и лица), у 15% - фокальная (одно или несколько пятен, расположенных в одной области кожного покрова), у 20% - вульгарная (симметрично расположенные множественные депигментированные пятна на различных участках кожного покрова). У 89% больных СВ заболевание прогрессировало в течение короткого времени и к моменту обследования приобретало стабильный характер. У 69% больных НСВ отмечался дальнейший рост очагов депигментации. Определение субпопуляций лимфоцитов у больных вити- лиго проводили методом проточной цитофлюорометрии с использованием моноклональных антител к различным маркерам лимфоцитов. Материалом для исследования была взятая натощак венозная кровь, собранная в пробирки Vacuteiner с гепарином или ЭДТА и хранившаяся не более 6 ч при комнатной температуре. Венозную кровь инкубировали с моноклональными антителами (100 мкл крови + 20 мкл флюоресцентномеченных антител) в течение 20 мин при температуре 4оС. Далее добавляли лизирующий рабочий буфер (BD FACS lysing solution, “BD Bioscience”). После инкубации в течение 10 мин клетки отмывали (300g, 5 мин при температуре 4°С) избытком забуференного фосфатами физиологического раствора. Полученный осадок отмывали раствором CellWash и фиксировали в 0,5 мл растворе BD CellFIX. Клетки анализировали не позднее 24 ч после фиксации. Результаты представляли в качестве среднего значения. Статистический анализ проводили с помощью пакета прикладных программ Statistica 5.5 (StatSoft, США). Различия р < 0,05 считали статистически значимыми. Результаты В таблице приведен популяционный состав лимфоцитов у больных различными формами витилиго, где видны статистически значимые различия иммунологических показателей от контрольных значений и различия между больными двух клинических форм. В обеих группах больных витилиго отмечено статистически значимое снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов по сравнению с аналогичными данными контрольной группы. В субпопуляции Т-лимфоцитов у 34 (85%) обследованных больных витилиго выявлено снижение содержания Т-хелперов (CD4) наряду с повышением содержания Т-супрессоров, снижение имму- норегуляторного индекса, определяемого по соотношению Т-супрессоров и Т-хелперов. Содержание в крови Т-лимфоцитов, а также Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток у больных СВ оказалось измененным по сравнению с аналогичными показателями больных НСВ. Популяционный состав лимфоцитов у больных различными формами витилиго Иммунологический показатель Группа контроля (n = 20) Больные СВ (n = 20) Больные НСВ (n = 20) абс. % абс. % абс. % Т-лимфоциты (CD3+), кл/мкл* 1085 ± 237,3 72,2 ± 8,1 1112,4 ± 416,5 71,2 ± 6,0 1648,4 ± 312,2 68,5 ± 6,1 Т-хелперы (CD4+), кл/мкл* 722,8 ± 159,6 41,4 ± 6,3 788,3 ± 166,5 40,8 ± 2,1 1046,3 ± 164,5 39,2 ± 3,0 Т-супрессоры (CD8+), кл/мкл* 505,2 ± 55,8 29,4 ± 5,2 699,6 ± 170,5 27,9 ± 3,2 644,1 ± 23,4 26,5 ± 5,4 Иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+)* 1,68 ± 0,4 1,67 ± 0,9 1,66 ± 0,6 В-лимфоциты (CD19+), кл/мкл 196 ± 89,5 10,9 ± 2,1 199 ± 57,3 9,1 ± 2,7 202,4 ± 92,0 8,9 ± 2,9 Нулевые клетки (CD3-16+/56+), кл/мкл* 512,7 ± 29,3 15,1 ± 3,1 500 ± 17,9 13,9 ± 2,7 228,4 ± 44,7 9,4 ± 3,2 Циркулирующие иммунные комплексы, усл.ед. * 10,6 ± 0,66 9,8 ± 0,72 15,2 ± 0,9 Примечание. * -р< 0,05 - различия между показателями групп статистически значимы. У большинства больных СВ в отличие от больных НСВ наблюдались незначительные изменения изученных показателей, хотя и прослеживалась тенденция к снижению содержания Т-лимфоцитов и Т-хелперов, повышению содержания Т-супрессоров. У больных НСВ дисбаланс в клеточном звене иммунитета характеризовался более выраженным снижением показателей Т-лимфоцитов и Т-хелперов наряду с повышенной супрессивной активностью. Кроме того, у 17 (85%) больных НСВ выявлено статистически значимое повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов по сравнению с аналогичным показателем у больных СВ и контрольной группы. Подобные изменения можно интерпретировать как результат нарушения иммунного ответа на продолжительное антигенное раздражение, или как результат истощения иммунокомпетентных клеток и изменения их адекватных реакций, чего не наблюдалось у больных СВ. Субпопуляция В-лимфоцитов (CD19+) у больных НСВ оказалась статистически значимо выше, чем у больных СВ, однако значения показателей находились в пределах допустимых колебаний. Содержание нулевых клеток (CD3-16+/56+), осуществляющих процесс пролиферации и цитодифференцировки, у больных СВ было в пределах контрольных значений, у больных НСВ снижено в 2 раза по сравнению с нормой. Обсуждение Анализируя количественные взаимоотношения различных субпопуляций лимфоцитов, можно отметить, что при НСВ тяжелое клиническое течение в виде распространенного процесса и постоянного прогрессирования сочетается с более выраженными изменениями в количественном балансе иммунокомпетентных клеток. Особый характер иммунных нарушений в зависимости от клинической формы, очевидно, связан с различными патогенетическими механизмами, которые впоследствии и активирует иммунные и воспалительные реакции, приводящие к деструкции меланоцитов, как у больных СВ, так и у больных НСВ [12, 13]. Иммунный дисбаланс при СВ, возможно, связан с усиленным функционированием симпато-адреналовой системы, так как известно, что симпатические регуляторные влияния повышают уровень иммунологического реагирования [13-15]. Высказывают предположение об аутоиммунной природе СВ, на что указывают 10-12% случаев ассоциации СВ с аутоиммунными заболеваниями [12, 13]. Описаны случаи ассоциации СВ с алопецией и псориазом [13], синдромом дистрофии 20 ногтей у 2 больных [16], красным плоским лишаем, где пятна локализовались непосредственно в очагах депигментации [17], а также со склеродермией [18]. Подобного рода ассоциации могут быть объяснены участием в патогенезе этих заболеваний CD8+ аутореактивных Т-лимфоцитов, играющих ключевую роль в аутоиммунных заболеваниях. Таким образом, механизм депигментации обеспечивается организованными определенным образом и соподчиненными между собой системами, где важная роль принадлежит иммунной системе. Дальнейшие исследования в этом направлении могут способствовать разработке обоснованных дифференцированных подходов к лечению этого заболевания.

About the authors

L. A Sharafutdinova

I.M. Setchenov First Moscow State Medical University

Moscow, Russia

Konstantin M. Lomonosov

I.M. Setchenov First Moscow State Medical University

Email: lamdinic@yandex.ru
MD, PhD, DSc, prof. Moscow, Russia

References

Supplementary files