ДИАГНОСТИКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТОКСИДЕРМИИ МЕТОДОМ СТИМУЛИРОВАННОЙ СУЛЬФАТОМ БАРИЯ ЛЮМИНОЛЗАВИСИМОЙ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ
- Авторы: Теплюк Н.П1, Шимановский Н.Л2, Семейкин А.В2, Кадырова З.С.1
-
Учреждения:
- ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет)
- ФГАОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России
- Выпуск: Том 22, № 5-6 (2019)
- Страницы: 177-184
- Раздел: Статьи
- Статья получена: 24.08.2020
- Статья опубликована: 15.12.2019
- URL: https://rjsvd.com/1560-9588/article/view/42956
- DOI: https://doi.org/10.17816/dv42956
- ID: 42956
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Полный текст
Лекарственная токсидермия (ЛТ) - острое воспаление кожных покровов и слизистых оболочек, которое развивается под действием лекарственного препарата, попавшего внутрь организма через дыхательную систему, пищеварительный тракт, при инфузионном введении [1, 2]. ЛТ составляет 25% среди побочных эффектов лекарственных средств, являясь огромной проблемой для системы здравоохранения и фармацевтического производства [2]. В настоящее время растёт число лекарственных препаратов, применяемых в лечебной практике; повышается риск развития ЛТ. В связи с этим назрела острая необходимость в разработке методов лабораторной диагностики ЛТ [3, 4]. Лимфоциты, тучные клетки, базофилы, полиморфноядерные лейкоциты (ПМЛ), эозинофилы участвуют в патогенезе ЛТ. ПМЛ принимают участие в качестве клеток-эффекторов в аллергических реакциях; при этом наблюдается изменение как количества ПМЛ в тканях, так и их функциональной активности (способность продуцировать активные формы кислорода (АФК), участвовать в процессе фагоцитоза, ферментативная активность, хемотаксис и др.) [5, 6]. Разработка и применение метода хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови выявили новые возможности для определения повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, в том числе НПВС и антибиотикам, путём оценки секреции АФК ПМЛ [6]. В 1985 г. В.И. Пыцкий и соавт. [6] открыли феномен специфического угнетения аллергеном стимулированной сульфатом бария люминолзависимой хемилюминесценции лейкоцитов (СЛХЛ) периферической крови сенсибилизированных людей и разработали тест для выявления сенсибилизации к пыльцевым, лекарственным (пенициллин) и другим аллергенам. В дальнейшем было обнаружено изменение СЛХЛ при псевдоаллергии и создан тест in vitro для выявления непереносимости аспирина и анальгина. Назрела необходимость подобрать метод СЛХЛ для диагностики ЛТ с другими препаратами группы НПВС и антибиотиков и на основе него создать эффективный метод для определения гиперчувствительности на лекарственные средства in vitro у больных ЛТ и для диагностики аллергической реакции на конкретный лекарственный препарат. Кроме того, важно разработать метод персонифицированного подбора заместительной терапии. В ходе ретроспективного анализа 100 историй болезней пациентов с ЛТ за период с 2012 по 2016 г., проведённого в клинике кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, было определено, что наиболее часто заболевание развивалось при приёме лекарственных препаратов группы НПВС - у 39% - и антибиотиков - у 22% (p < 0,01). Среди лекарственных препаратов группы НПВС развитие ЛТ в наибольшей степени было вызвано приёмом ибупрофена - 23,9%, нимесулида - 23,9% и парацетамола - 23,9% случаев (p ≤ 0,003); среди лекарственных препаратов группы антибиотиков - приёмом амоксициллина (22,7%) и цефтриаксона (22,7%) (p < 0,01) [7]. Учитывая высокую долю случаев ЛТ, вызванных приёмом ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона, было необходимо опробовать метод СЛХЛ у пациентов с непереносимостью данных препаратов. Цель работы - определить влияние ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона на СЛХЛ цельной крови у больных ЛТ, возникшей после приёма данных лекарственных препаратов, и участников контрольной группы для подбора препаратов с целью заместительной терапии. Материал и методы В исследование включили 67 пациентов (44 женщины и 23 мужчины) с ЛТ в возрасте от 18 до 75 лет (медиана возраста 53 года), из них ЛТ развилась после приёма ибупрофена у 22,4%, парацетамола - у 20,9%, нимесулида - у 19,4%, амоксициллина - у 20,9%, цефтриаксона - у 16,4% (рис. 1). Все больные проходили лечение в клинике кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет). Критерии включения пациентов в исследование: развитие кожной реакции после приёма вышеуказанных лекарственных препаратов. Критерии невключения: состояние алкогольного или наркотического опьянения у пациента, невозможность забора венозной крови у пациента, приём антигистаминных, антисеротониновых, антилейкотриеновых препаратов, кромоглициевой кислоты, системных глюкокортикостероидов за 2 нед и менее до исследования. Контрольная группа состояла из 67 человек (42 женщины и 25 мужчин) в том же возрастном диапазоне, ранее принимавших данные лекарственные препараты без проявления ЛТ. Измерение СЛХЛ проводили на хемилюминометре Lum-100, разработанном на кафедре медицинской биофизики факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова. Статистический анализ полученных результатов проводили с помощью пакета программ Excel 2010 и Statistica 7.0 с использованием критериев Фишера, Манна-Уитни и Стьюдента. Полученные результаты представлены в виде M ± m (М - среднее арифметическое, m - ошибка среднего). Различия считали статистически значимыми при p < 0,05. Для исследования использовали гепаринизированную венозную кровь (50 ЕД/мл). Из образцов крови отбирали объёмы, содержащие 1 × 106 лейкоцитов, и доводили до 0,70 мл средой Хенкса. Пробы инкубировали в течение 45 мин при температуре 37 °С при постоянном перемешивании. В кювету хемилюминометра вносили 0,70 мл пробы и 0,15 мл активатора свечения - люминола (“Sigma-Aldrich”, США) с концентрацией 2 мМ. Далее измеряли уровень спонтанной хемилюминесценции (ХЛ). Затем к полученным образцам добавляли 0,15 мл активатора свечения - сульфата бария («ВИПС-МЕД», Россия) в концентрации 2 мг/мл, после чего измеряли уровень стимулированной ХЛ. Регистрацию кинетики стимулированной ХЛ проводили в течение 50 мин при температуре 37 °С. Для определения влияния аллергена (лекарственного препарата, вызвавшего реакцию) на СЛХЛ к полученным пробам добавляли 0,01 мл лекарственного препарата, растворённого в воде для инъекций. Для подбора препаратов для заместительной терапии к пробам крови добавляли 0,01 мл раствора выбранного препарата. В контрольные пробы вместо исследуемого аллергена или препарата для заместительной терапии добавляли воду для инъекций в том же объёме. Далее проводили регистрацию СЛХЛ. С помощью программы PowerGraph определяли следующие параметры СЛХЛ (рис. 2): •интенсивность спонтанной ХЛ; •интенсивность максимальной ХЛ; •интенсивность стимулированной ХЛ (разница между максимальной и спонтанной ХЛ); •относительная интенсивность ХЛ (отношение интенсивности стимулированной ХЛ в опыте к интенсивности стимулированной ХЛ в контроле); •светосумма (площадь под кривой ХЛ, начиная от введения сульфата бария и до окончания кинетики). Результаты В первой серии экспериментов проведено исследование влияния ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона на интенсивность и светосумму СЛХЛ крови участников контрольной группы и больных ЛТ. Была выявлена статистически значимая зависимость между изменением относительной интенсивности СЛХЛ и концентрацией препаратов в обеих группах испытуемых. В контрольной группе отмечено, что минимальные концентрации лекарственных препаратов (как группы НПВС - ибупрофен, нимесулид, парацетамол, так и антибиотиков - амоксициллин, цефтриаксон) стимулировали СЛХЛ крови, а максимальная концентрация подавляла СЛХЛ. У пациентов с ЛТ стимуляция СЛХЛ не наблюдалась, а ингибирование СЛХЛ происходило при применении препаратов в меньших концентрациях, чем в контрольной группе. На всех исследованных нами концентрациях лекарственных препаратов относительная интенсивность СЛХЛ у больных была значимо ниже, чем у участников группы контроля (табл. 1, 2). Следовательно, можно сделать вывод, что ибупрофен, нимесулид, парацетамол, амоксициллин, цефтриаксон дозозависимо влияют на СЛХЛ цельной крови как в контрольной группе, так и у больных с непереносимостью данных лекарственных препаратов. Активация СЛХЛ в контрольной группе при инкубации проб крови с малыми концентрациями препаратов может быть обусловлена стимулирующим влиянием на выработку АФК фагоцитами продуктов липооксигеназного метаболизма арахидоновой кислоты (эйкозатетраеновых метаболитов, лейкотриена В4), образующихся в лейкоцитах под влиянием лекарственных препаратов [3, 8, 9]. Эйкозатетраеновые метаболиты, являющиеся оксидантами, могут напрямую взаимодействовать с люминолом, усиливая ХЛ фагоцитов [3, 10, 11]. Ингибирующее действие высоких концентраций лекарственных препаратов на СЛХЛ крови участников контрольной группы может быть вызвано уменьшением активности простагландинсинтазы, снижением синтеза эйкозатетраеновых метаболитов в лейкоцитах периферической крови, усилением его антиокислительной активности [3, 12, 13]. Подавление СЛХЛ крови пациентов с ЛТ, возможно, происходит за счёт влияния на системы медиаторов аллергических и воспалительных реакций: лейкотриенов, гистамина и серотонина [3, 14, 15]. Показатели светосуммы у пациентов с ЛТ были значимо ниже, чем у участников контрольной группы. Данные результаты могут свидетельствовать о снижении суммарной продукции АФК ПМЛ у больных (табл. 3, 4). В следующей серии опытов проводили подбор лекарственных препаратов для заместительной терапии у пациентов с ЛТ (табл. 5, 6). В результате исследования было выявлено, что при инкубации образцов крови пациентов с минимальными концентрациями ЛПТ и ЛПЗ существенных различий показателей относительной интенсивности и светосуммы СЛХЛ нет (p > 0,05). Однако в пробах крови с максимальной концентрацией ЛПТ показатели СЛХЛ значительно ниже, чем в пробах с максимальной концентрацией ЛПЗ (p < 0,01). Полученные результаты доказывают, что метод СЛХЛ подходит как для диагностирования ЛТ, вызванной приёмом ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона, так и для персонифицированного подбора лекарственного препарата с целью заместительной терапии. Выводы • При воздействии ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона на кровь больных с непереносимостью данных препаратов и контрольной группы наблюдается концентрационнозависимое изменение СЛХЛ. Относительная интенсивность и светосумма СЛХЛ крови у больных достоверно ниже таковой у контрольной группы на всех исследованных концентрациях препарата (p < 0,01). • При максимальной концентрации относительная интенсивность и светосумма СЛХЛ крови у больных достоверно ниже в пробах с ЛПТ, чем с ЛПЗ (p < 0,01) При минимальной концентрации значительные отличия показателей отсутствуют (p > 0,05). • Выявленные достоверные различия показателей СЛХЛ позволяют применить хемилюминесцентный метод для диагностики непереносимости ибупрофена, парацетамола, нимесулида, амоксициллина, цефтриаксона и для персонифицированного подбора препаратов для заместительной терапии.Об авторах
Н. П Теплюк
ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет)119991, г. Москва, Россия
Н. Л Шимановский
ФГАОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России119435, г. Москва, Россия
А. В Семейкин
ФГАОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России119435, г. Москва, Россия
Зилола Салимовна Кадырова
ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет)
Email: rose1604@yandex.ru
аспирант кафедры кожных и венерических болезней ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет). 119991, г. Москва, Россия 119991, г. Москва, Россия
Список литературы
- Олисова О.Ю., ред. Кожные и венерические болезни: Учебник. М.: Практическая медицина; 2015: 149-51.
- Файзуллина Е.В., Давыдов Ю.В. Лекарственная токсикодермия: лечение и профилактика. Практическая медицина. 2013; (1): 9-12.
- Чаусова С.В., Бондарева Г.П., Усанова Е.А. Влияние диклофенака натрия на оксидантные функции полиморфно-ядерных лейкоцитов периферической крови здоровых доноров и больных с повышенной чувствительностью к диклофенаку. Медицинский вестник Башкортостана. 2014; 9(1): 73-6.
- Чаусова С.В., Гуревич К.Г., Усанова Е.А., Арутюнова У.Э., Балякин Ю.В., Малышев И.Ю. Влияние нестероидных противовоспалительных препаратов на хемилюминесценцию полиморфно-ядерных лейкоцитов у пациентов с непереносимостью данных препаратов. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2014; 77(5): 28-31.
- Czech W., Barbisch M., Tenscher K., Schopf E., Schroder J.M., Norgauer J. Chemotactic 5-oxo-eicosatetraenoic acidsinduce oxygen radical production, Ca2+-mobilization, and actin reorganization in human eosinophils via a pertussis toxin-sensitive G-protein. J. Invest. Dermatol. 1997; 108(1): 108-12.
- Чаусова С.В. Особенности оксидантной активности фагоцитов периферической крови больных с непереносимостью нестероидных противовоспалительных препаратов и обоснование патогенетической терапии непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов: Автореф. дис. … д-ра мед. наук: Москва; 2016: 3-6.
- Теплюк Н.П., Кадырова З.С. Разнообразие клинических проявлений лекарственной токсидермии у больных, находившихся на лечении в клинике кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава Росии. Современные проблемы науки и образования. 2019; 3. Доступно на: http://science-education.ru/ru/article/view?id=28900 (28.02.2020).
- Бизунок Н.А. Влияние противовоспалительных средств на фагоцитарную генерацию оксидантов. Белорусский медицинский журнал. 2002; 2: 56-8.
- Dona I., Blanca-Lopez N., Torres M.J., Garcia-Campos J., Garcia Nunez I., Gomez F., et al. Drug hypersensitivity reactions: response patterns, drug involved, and temporal variations in a large series of patients. J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 2012; 22(5): 363-71.
- Dai H.F., Wang X.W., Zhao K. Role of nonsteroidal anti-inflammatory drugs in the prevention of post-ERCP pancreatitis: a meta-analysis. Hepatobiliary Pacreat. Dis. Int. 2009; 8(1): 11-6.
- Lee Q.U. Hypersensitivity to antipyretics: pathogenesis, diagnosis, and management. Hong Kong Med. J. 2017; 23(4): 395-403.
- Takayama F., Egashira T., Yamanaka Y. Effect of diclofenak, a nonsteroidal anti-inflammatory drug, on lipid peroxidation caused by ischemia-reperfusion in rat liver. Jap. J. Pharmacol. 1994; 64(1): 71-8.
- Bhattacharya S. The facts about penicillin allergy: a review. J. Adv. Pharm. Technol. Res. 2010; 1(1): 11-7.
- Cornego-Garcia J.A., Jurado-Escobar R., Dona I., Blanca M. The genetics of drug hypersensitivity reactions. J. Invest. Allergol. Clin. Immunol. 2016; 26(4): 222-32.
- Pham D.L., Kim J.H., Trinh T.H., Park H.S. What we know about nonsteroidal anti-inflammatory drug hypersensitivity. Korean J. Intern. Med. 2016; 31(3): 417-32.