Роль TLR7 в иммунопатогенезе псориаза и псориатического артрита

Полный текст

ОБОСНОВАНИЕ

Псориаз ― хроническое заболевание мультифакториальной природы с доминирующим значением генетических факторов, характеризуемое ускоренной пролиферацией кератиноцитов, нарушением их дифференцировки, дисбалансом между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами, с частыми патологическими изменениями опорно-двигательного аппарата [1]. На сегодняшний день псориаз является самым распространённым хроническим дерматозом и встречается у 1–2% населения развитых стран.

Молекулярные механизмы патогенеза псориаза до сих пор до конца неясны. В настоящее время активно изучаются функции различных звеньев врождённого иммунитета в развитии псориаза, в частности роль различных toll-подобных рецепторов (toll-like receptors, TLRs). TLRs ― класс рецепторов врождённой иммунной системы, которые распознают патогенассоциированные молекулярные шаблоны и активируют иммунный ответ, т.е. являются важным сенсором различных вирусных и бактериальных инфекций. Кроме того, они распознают молекулярные маркеры, связанные с повреждением эндогенного происхождения [2]. В ряде работ показано, что TLRs могут быть возможным эффектором псориаза. TLRs рекрутируют адаптерные белки и активируют факторы транскрипции для производства воспалительных цитокинов, которые способствуют инициации адаптивных иммунных ответов [3].

У человека семейство TLR состоит из 10 видов рецепторов, которые экспрессируются на поверхности клеток и внутриклеточно. Внутриклеточные TLR, в частности TLR3, TLR7, TLR8 и TLR9, распознают нуклеиновые кислоты [4]. TLR7 распознаёт одноцепочечную РНК и транспортирует её в эндосомы [5]. Результаты некоторых последних научных исследований показали, что активация TLR7 может способствовать развитию псориаза [6], при этом механизм такой активации до сих пор непонятен. Ген TLR7 кодирует трансмембранный белок из 1049 аминокислот. Ген картирован в области хромосомы Х 12.87-12.89 и содержит один экзон [7]. TLR7 распознаёт одноцепочечные РНК (ssRNA), в том числе и те, которые содержатся в некоторых вирусах. Активация TLR7 может приводить к активации различных иммунных клеток, таких как дендритные клетки и макрофаги, что вызывает высвобождение провоспалительных цитокинов. В свою очередь провоспалительные цитокины, например фактор некроза опухоли альфа (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) и интерлейкин 6 (interleukin, IL), могут стимулировать кератиноциты к размножению и ускоренной дифференцировке [6–8].

Важным в понимании патогенеза псориаза и псориатического артрита является то, что активация TLR7 может способствовать воспалению суставов через активацию синовиальных макрофагов и дендритных клеток. Это приводит к высвобождению провоспалительных цитокинов, которые могут стимулировать воспаление в суставах и приводить к повреждению суставной ткани [9]. Активация TLR7 может происходить в ответ на условия окружающей среды и биофизические факторы при определённой генетической предрасположенности. Такая реакция врождённого и адаптивного иммунного ответа приводит к усилению секреции различных цитокинов, таких как IL-1, IL-6, TNF-α, IL-17 и IL-23 [10–12]. Кроме того, активация Т-клеток и макрофагов считается необходимым условием для инициации воспалительных и деструктивных процессов в суставах. Более подробно патогенез воспаления в суставах при псориатическом артрите можно представить следующим образом: дендритные клетки индуцируют дифференцировку Т-клеток, представляя антигены и секретируя различные провоспалительные цитокины. Повышенная экспрессия TLR-2 обнаружена в незрелых дендритных клетках пациентов с псориатическим артритом [13]. У пациентов с псориатическим артритом в синовиальной жидкости наблюдается повышенная доля незрелых миелоидных дендритных клеток по сравнению с плазмоцитоидными дендритными клетками. При псориатическом артрите стимуляция TLR приводит к поляризации Т-клеток в сторону субпопуляции Th1, что впоследствии увеличивает выработку интерферона гамма (IFN-γ), TNF-α и IL-2. Плазмоцитоидные дендритные клетки генерируют цитокины, в том числе IFN-γ, TNF-α, IL-12 и IL-23, которые впоследствии служат сигналами для клональной пролиферации CD4+ и CD8+ Т-клеток. Активированные макрофаги участвуют в различных провоспалительных процессах в синовиальной оболочке суставов. Так, воспаление кожи, индуцированное лигандом TLR-7 на мышиных моделях, было связано с инфильтрацией макрофагов CD68+ и стимуляцией экспрессии воспалительных цитокинов в суставах. Это исследование показало, что макрофаги могут способствовать воспалительному процессу при псориатическом артрите и быть решающим фактором в переходе воспаления с кожи на суставы [9]. Активация же TLR-7 увеличивает соотношение провоспалительных (M1) / противовоспалительных (M2) макрофагов при псориатических поражениях кожи [14]. Макрофаги с фенотипом М1 при псориатическом артрите секретируют провоспалительные цитокины, активирующие Т- и В-клетки посредством презентации антигена и стимулируют резорбцию кости [15]. Тучные клетки, расположенные в синовиальной оболочке суставов, индуцируют ангиогенез, рекрутирование нейтрофилов и пролиферацию синовиальных фибробластов, указывая на то, что эти клетки могут активно способствовать воспалительному артриту. В синовиальной оболочке периферического спондилоартрита тучные клетки являются преобладающим источником IL-17A [16].

TLR7 индуцирует выработку дендритными клетками мембраносвязанного хемокина CXCL16, который экспрессируется на их поверхности. В исследовании J. Lu и соавт. [17] показано, что данный хемокин сверхэкспрессируется в кожных поражениях при пустулёзном псориазе, а нейтрофилы, в свою очередь, экспрессируют его рецептор. Известно, что CXCL16 обеспечивает активацию нейтрофилами секреции воспалительных факторов IL-8 и TNF-α.

Совместное культивирование нейтрофилов с дендритными клетками, обработанными ингибитором TLR7 или агонистом TLR7, продемонстрировало, что TLR7 регулирует активацию, миграцию и апоптоз нейтрофилов. По результатам проведённых исследований авторы предположили, что TLR7 может влиять на высвобождение дендритными клетками CXCL16 и на провоспалительные эффекты нейтрофилов, вмешиваясь в сигнальный путь гена первичного ответа миелоидной дифференцировки 88 (MyD88). Посредством активации сигнального пути TLR7-MyD88-DC-CXCL16 возникают миграция нейтрофилов к поражениям кожи, их активация и воспалительная реакция при пустулёзном псориазе.

Таким образом, по результатам анализа последних российских и международных исследований можно заключить, что TLR7 играют значимую роль в развитии воспаления при псориазе и псориатическом артрите, при этом данных о роли различных полиморфных маркеров гена TLR7 крайне мало.

В ходе исследования нами проанализирован полиморфный маркер rs179009 в гене TLR7 и его ассоциация у больных псориазом разной степени тяжести.

В последнее время как в России, так и за рубежом активно исследуется роль маркеров TLR7 при различных заболеваниях [18–20]. В частности, Э.С. Галимова и соавт. [7] проанализировали ассоциацию полиморфных вариантов (rs179003, rs179008, rs179020, rs850632, rs12013728) гена TLR7 с риском развития псориаза у индивидов татарской этнической принадлежности и показали, что из всех изученных полиморфных вариантов гена TLR7 только вариант rs179008 достоверно коррелирует с риском возникновения псориаза. Однако исследований полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 и его ассоциаций у больных псориазом и псориатическим артритом пока не проводилось.

Цель исследования ― изучение роли полиморфного маркера rs179009 гена TLR7 у больных тяжёлыми формами псориаза.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Дизайн исследования

Случай-контроль.

Первичная конечная точка ― выявление различий в аллелях и генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у больных псориазом и псориатическим артритом в зависимости от степени тяжести и времени дебюта заболевания. Промежуточных конечных точек нет.

Критерии соответствия

Критерии включения: впервые или ранее установленный диагноз псориаза; возраст от 18 лет; пациенты разного пола.

Критерии невключения: несоответствие критериям включения; наличие тяжёлой сопутствующей патологии или других аутоиммунных заболеваний в анамнезе; нежелание пациента по каким-либо причинам участвовать в исследовании.

Критерии исключения: желание пациента прекратить участие в исследовании.

Условия проведения

Исследование проведено на базах филиала № 8 ФГБУ «Главный военный клинический госпиталь имени академика Н.Н. Бурденко» Министерства обороны Российской Федерации, Европейского медицинского центра, филиала «Клиника Короленко» ГБУЗ «Московский научно-практический Центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения города Москвы».

Продолжительность исследования

Исследование выполнено в период с 2016 по 2023 год.

Описание медицинского вмешательства

Всем пациентам проведено комплексное клинико-лабораторное обследование, включающее сбор семейного анамнеза, анамнеза заболевания, осмотр, клинический анализ крови, клинический анализ мочи, биохимический анализ крови.

Для оценки площади и тяжести псориатических поражений использован стандартизованный метод оценки ― определение индекса PASI (Psoriasis Area and Severity Index). В соответствии с клиническими рекомендациями [1], значение PASI в пределах 10 баллов характеризует относительно лёгкое течение заболевания, от 10 до 19 баллов ― среднюю тяжесть процесса, а индекс PASI более 20 свидетельствует о тяжёлой форме псориатического процесса.

Анализ показателей врождённого иммунитета в группе исследования проводился путём получения РНК из периферической венозной крови с помощью Набора для выделения РНК из клинического материала (Интерлабсервис, Россия), методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с TaqMan зондами исследовались полиморфизмы гена TLR7 (rs179009). Для постановки реакции обратной транскрипции использовали «Набор для проведения обратной транскрипции» (Синтол, Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Далее проводили ПЦР в режиме реального времени с применением красителя SYBR Green (ДТ-96). Праймеры и реактивы для ПЦР-реакции были синтезированы фирмой «Синтол» (Россия).

Основной исход исследования

Основным исходом исследования было выявление различий по частоте аллелей и генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у больных псориазом и псориатическим артритом.

Дополнительных исходов исследования не было.

Анализ в подгруппах

Группу исследования составили 168 (100%) пациентов с псориазом среднетяжёлого и тяжёлого течения, из них 45 (26,8%) женщин и 123 мужчины (73,2%). Средний возраст пациентов составил 54,0±14,0 года. Критериями CASPAR (Classification criteria for Psoriatic Arthritis) диагноз псориатического артрита подтверждён в 31 (18,5%) случае. Таким образом, вся группа исследования была разделена на две подгруппы: подгруппа 1 ― пациенты только с кожными проявлениями псориаза (n=137); подгруппа 2 ― пациенты с псориатическим артритом (n=31).

Методы регистрации исходов

У всех пациентов получали образцы периферической крови, из которой получали РНК, и методом ПЦР с TaqMan зондами исследовались полиморфизмы гена распознающего рецептора TLR7. После проведения ПЦР в реальном времени получали зависимости интенсивности флуоресценции от количества циклов амплификации. Рост кривой свидетельствовал о накоплении амплификата. Полученные данные после ПЦР-амплификации по каждому из исследуемых генов пересчитывались методом ΔΔCt относительно гена домашнего хозяйства β-актина.

Уровень экспрессии генов определяли относительно референтного образца с использованием метода 2^-∆∆Ct. Результаты представлялись в виде относительных единиц, которые демонстрировали, во сколько раз изменяется экспрессия гена в исследуемом образце по отношению к референсному образцу. В качестве внутреннего контроля был использован ген β-актина, являющегося «геном домашнего хозяйства», имеющего стабильный уровень экспрессии в разных клетках вне зависимости от условий.

Этическая экспертиза

Исследование одобрено этическим комитетом Медицинского института ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (протокол № 13 от 15.12.2022).

Статистический анализ

Статистический анализ и визуализация полученных данных проводились с использованием среды для статистических вычислений R 4.3.0 (R Foundation for Statistical Computing, Вена, Австрия), а также при помощи программы Microsoft Excel пакета Microsoft Office 2016.

Описательные статистики представлены в виде числа наблюдений (относительная частота) для категориальных переменных, среднего (± стандартное отклонение) и медианы (1-й и 3-й квартили) ― для количественных. Для сравнения групп в отношении количественных переменных использовался тест Манна–Уитни, в отношении категориальных показателей ― точный тест Фишера. При исследовании различий между группами в отношении количественных показателей производилась оценка средней разницы с соответствующими 95% доверительными интервалами (95% ДИ), в отношении бинарных показателей ― отношение шансов (ОШ) с соответствующим 95% ДИ, в отношении порядковых ― отношение пропорциональных шансов с соответствующим 95% ДИ (с использованием порядковой регрессии); для получения указанных оценок, скорректированных на длительность течения заболевания, использовались двухфакторные линейные, логистические регрессионные модели и модели пропорциональных шансов.

Анализ частоты встречаемости аллелей и генотипов в исследуемых группах рассчитывался при помощи критерия χ². В случае, если ожидаемое значение в одной из ячеек было менее 10, критерий χ² рассчитывался с поправкой Йейтса, а при ожидаемом значении меньше 5 для анализа использовался точный критерий Фишера. Для количественной оценки связи между возникновением псориатического артрита и носительством неблагоприятного полиморфного маркера были рассчитаны ОШ и 95% ДИ.

Статистически значимыми были результаты с p <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Объекты (участники) исследования

Группа исследования (n=168, 100%) разделена на две подгруппы: подгруппа 1 ― 137 пациентов только с кожными проявлениями псориаза; подгруппа 2 ― 31 больной с псориатическим артритом. Средний возраст пациентов составил 54,0±14,0 года (средний возраст пациентов подгруппы — 1 53,8±14,4 года, подгруппы 2 ― 54,7±12,5 года). Средняя длительность течения псориаза 25,7±16,6 года, длительность псориатического артрита ― 8,3±9,5 года. В табл. 1 представлена половозрастная характеристика пациентов, вошедших в исследование. При сравнительном анализе выявлено, что псориатический артрит статистически значимо чаще диагностировался у женщин, чем у мужчин: ОШ 3,34 (95% ДИ 1,48–7,59), p=0,006. Так, у 30 (66,7%) из 45 женщин группы исследования был диагностирован псориаз, у 15/45 (33,3%) ― псориатический артрит. У мужчин псориаз установлен в 107 (87,0%) случаях из 123, псориатический артрит ― в 16/123 (13%). Таким образом, псориатический артрит диагностировался в 3 раза чаще у женщин, чем у мужчин (p <0,05). По возрасту группы были сопоставимы.

 

Таблица 1. Характеристика пациентов группы исследования по полу и возрасту (n=168)

Table 1. Distribution of patients by sex and age (n=168)

Характеристика	Пациенты			p
	n=168	Подгруппа 1 n=137	Подгруппа 2 n=31
Пол: • женский • мужской	45 123	30 (66,7%) 107 (87,0%)	15 (33,3%) 16 (13,0%)	0,006
Возраст, лет	54,0±14,0 55 (43–65)	53,8±14,4 55 (43–65)	54,7±12,5 54 (44–67)	0,925

 

Среднее значение PASI составило 17,7±7,2, что соответствует тяжёлому течению псориаза у всех больных группы исследования, при этом у больных только с кожными проявлениями псориаза средний индекс PASI составил 17,3±7,2, а у пациентов с псориатическим артритом ― 19,5±6,9, т.е. у пациентов, страдающих псориатическим артритом, кожный процесс протекал тяжелее. Распределение пациентов группы исследования в зависимости от тяжести течения кожного процесса представлено на рис. 1. Как можно заметить, половина (49,4%) пациентов группы исследования имела индекс PASI 20–30, что соответствовало тяжёлой степени тяжести течения псориаза, при этом в подгруппе 1 PASI <10 имели 24,8% человек, PASI 10–20 ― 25,5%, PASI 20–30 ― 47,4%. Таким образом, в подгруппе 1 (только кожные проявления псориаза) большинство пациентов имели среднетяжёлую и тяжёлую степень течения кожного процесса. В подгруппе 2 (псориатический артрит) пациенты распределились по степени тяжести следующим образом: PASI <10 имели 6,5% человек, PASI 10–20 ― 32,3%, PASI 20–30 ― 58,1%. Таким образом, в подгруппе 2, как и подгруппе 1, большинство пациентов имели среднетяжёлую и тяжёлую степень течения кожного процесса. PASI >30 имели всего 4 (2,4%) пациента группы исследования. Учитывая малочисленность подгруппы пациентов с PASI >30, все они были исключены из дальнейшего сравнительного анализа.

 

Рис. 1. Распределение пациентов группы исследования в зависимости от тяжести течения кожного процесса (n=168, %). ПсА ― псориатический артрит.

Fig. 1. Distribution of patients depending on the severity of the skin process (n=168, %). ПсА ― psoriatic arthritis.

 

Основные результаты исследования

При сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов маркера rs179009 в гене TLR7 было выявлено, что аллели С и Т изучаемого маркера при псориазе и псориатическом артрите встречаются примерно с равной частотой, при этом аллель Т при псориазе встречался реже, чем при псориатическом артрите, ― 0,446 и 0,556 соответственно (ОШ 1,55; 95% ДИ 0,76–3,18; p >0,05), в то время как аллель С при псориазе регистрировался чаще, чем при псориатическом артрите, ― 0,554 и 0,444 соответственно (ОШ 1,55; 95% ДИ 0,76–3,18; p >0,05); рис. 2. При анализе генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 выявлено, что гомозигота СС встречается чаще у пациентов с псориазом, чем у пациентов с псориатическим артритом, ― 0,344 и 0,222 соответственно (ОШ 1,83; 95% ДИ 0,56–6,04; p >0,05). Гомозигота ТТ, напротив, у больных псориазом выявляется реже, чем у больных псориатическим артритом, ― 0,237 и 0,333 соответственно (ОШ 0,62; 95% ДИ 0,21–1,84; p >0,05); см. рис. 2. Таким образом, как видно из рис. 2, определяется тенденция к обнаружению аллеля С и гомозиготы СС у больных псориазом, в то время как выявление аллеля Т и гомозиготы ТТ чаще происходит у больных псориатическим артритом.

 

Рис. 2. Распределение частоты аллелей (a) и генотипов (b) полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 в группах пациентов с псориазом и псориатическим артритом (n=168). По оси абсцисс представлены исследуемые группы, по оси ординат ― частота (p >0,05). ПсА ― псориатический артрит.

Fig. 2. Distribution of allele (a) and genotype (b) frequencies of polymorphic marker rs179009 in TLR7 gene in patients with psoriasis and psoriatic arthritis (n=168). The abscissa axis represents the studied groups, the ordinate axis represents the frequency (p >0.05). ПсА ― psoriatic arthritis.

 

Проанализирована также встречаемость полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 в зависимости от степени тяжести кожного процесса у больных псориазом (рис. 3). Как видно из рис. 3, аллели С и Т изучаемого маркера при различной степени тяжести течения кожного процесса встречаются примерно с равной частотой. При анализе генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 выявлено, что гетерозигота СТ значимо чаще встречалась у больных с лёгкой степенью течения псориаза (0,567 случаев; ОШ 2,94; 95% ДИ 0,98–8,86). Гомозиготы СС и ТТ встречались в основном у пациентов при среднетяжёлой и тяжёлой степени тяжести псориаза. Гомозигота СС встречалась всего в 0,267 случаях при PASI <10, в 0,708 случаях при PASI >10 (p <0,05). Гомозигота ТТ регистрировалась в 0,167 случаях при PASI <10, в 0,686 случаях при PASI >10 (p <0,05). Таким образом, можно заключить, что гомозиготное носительство генотипов СС и ТТ полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 предрасполагает к более тяжёлому течению кожного процесса при псориазе.

 

Рис. 3. Распределение частоты аллелей (a) и генотипов (b) полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у пациентов с псориазом в зависимости от степени тяжести течения кожного процесса (n=164). По оси абсцисс представлены исследуемые группы, по оси ординат ― частота (p >0,05).

Fig. 3. Distribution of allele (a) and genotype (b) frequencies of polymorphic marker rs179009 in the TLR7 gene in psoriasis patients depending on the severity of the skin process (n=164). The abscissa axis represents the studied groups, the ordinate axis represents the frequency (p >0.05).

 

Как известно, возраст дебюта заболевания зависит от типа псориаза. Псориаз I типа связан с системой HLA антигенов (HLA Cw6, HLA B13, HLA B17). Этим типом псориаза страдает 65% больных, дебют заболевания приходится на молодой возраст (18–25 лет). Псориаз II типа не связан с системой HLA антигенов и возникает в более старшем возрасте (после 40 лет) [21]. Средний возраст дебюта псориаза в нашем исследовании составил 45 (31–58) лет (минимальный возраст 11 лет, максимальный ― 79 лет); более чем у половины пациентов (57,1%) длительность псориаза была более 1 года, при этом не выявлено статистически значимых различий в отношении возраста дебюта псориаза между группами пациентов с псориазом и псориатическим артритом. Средний возраст дебюта псориатического артрита составил 52 (35–57) года (минимальный возраст 22 года, максимальный ― 69 лет); 21 (67,7%) пациент имел псориатический артрит в дебюте заболевания.

Для оценки влияния гена TLR7 на возраст дебюта псориаза мы провели анализ встречаемости полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 в зависимости от возраста дебюта заболевания (рис. 4). Выявлено, что аллель С изучаемого маркера достоверно чаще встречается у пациентов с поздним дебютом псориаза. Так, у больных с дебютом до 40 лет частота встречаемости составила 0,400, с дебютом после 40 лет ― 0,632 (ОШ 0,38; 95% ДИ 00,2–0,74; p <0,01). Аллель Т, напротив, встречался достоверно чаще у больных с ранним дебютом псориаза. Так, у больных с началом псориаза до 40 лет он регистрировался с частотой 0,600, а у больных с началом после 40 лет ― с частотой 0,368 (ОШ 0,38; 95% ДИ 00,2–0,74; p <0,01). При анализе генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 выявлено, что встречаемость гомозиготных генотипов СС и ТТ также имеет статистически значимые различия. Генотип СС у больных с ранним дебютом встречался с частотой 0,175, у больных с поздним дебютом псориаза ― 0,395 (ОШ 0,32; 95% ДИ 0,11–0,92; p <0,05). Генотип ТТ, напротив, достоверно чаще регистрировался у больных с дебютом кожного процесса до 40 лет, чем после 40 лет, ― в 0,375 и 0,132 случаях соответственно (ОШ 3,96; 95% ДИ 1,27–12,35; p <0,05). Таким образом, наличие у больного аллеля С или гомозиготы СС маркера rs179009 в гене TLR7 является предиктором позднего начала кожного процесса, в то время как наличие аллеля Т или гомозиготы ТТ статистически значимо предрасполагает к раннему дебюту заболевания.

 

Рис. 4. Распределение частоты аллелей (a) и генотипов (b) полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у пациентов с псориазом в зависимости от возраста дебюта псориаза (n=168). По оси абсцисс представлены исследуемые группы, по оси ординат ― частота (p <0,05).

Fig. 4. Distribution of allele (a) and genotype (b) frequencies of polymorphic marker rs179009 in the TLR7 gene in psoriasis patients depending on the age of psoriasis debut (n=168). The abscissa axis represents the studied groups, the ordinate axis represents the frequency (p <0.05).

 

При сравнительном анализе частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у пациентов с псориатическим артритом были также выявлены достоверно значимые различия в зависимости от возраста дебюта артрита (рис. 5). Так, аллель Т чаще встречался у больных псориатическим артритом с ранним дебютом артрита, чем у больных псориазом с поздним присоединением артрита ― с частотой 0,75 и в 0,25 соответственно (ОШ 0,11; 95% ДИ 0,02–0,58; p <0,05). Аллель С ассоциировался с поздним началом артрита по сравнению с группой больных псориазом с ранним присоединением артрита ― с частотой 0,75 и 0,25 соответственно (ОШ 0,11; 95% ДИ 0,02–0,58; p <0,05). При анализе генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 в зависимости от возраста дебюта заболевания выявлена тенденция к более частой встречаемости гомозиготы ТТ у больных с ранним дебютом псориатического артрита. Гомозигота СС и гетерозигота СТ встречались чаще у больных псориазом с поздним присоединением суставной симптоматики. Так, гомозигота СС регистрировалась в 0,1 случае при раннем дебюте псориатического артрита и в 0,5 случаях ― при позднем (ОШ 0,11; 95% ДИ 0,01–1,52; p <0,05). Гомозигота СТ регистрировалась в 0,3 случаях при раннем дебюте псориатического артрита и в 0,5 случаях ― при позднем (ОШ 0,42; 95% ДИ 0,05–3,48; p <0,05).

 

Рис. 5. Распределение частоты аллелей (a) и генотипов (b) полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у пациентов с псориатическим артритом в зависимости от возраста дебюта псориаза (n=31). По оси абсцисс представлены исследуемые группы, по оси ординат ― частота (p <0,05).

Fig. 5. Distribution of allele (a) and genotype (b) frequencies of polymorphic marker rs179009 in TLR7 gene in patients with psoriatic arthritis depending on the age of psoriasis debut (n=31). The abscissa axis represents the studied groups, the ordinate axis represents the frequency (p <0.05).

 

Нежелательные явления

Нежелательные явления не зарегистрированы.

ОБСУЖДЕНИЕ

Резюме основного результата исследования

В нашей работе впервые проанализирована частота встречаемости аллелей и генотипов маркера rs179009 гена TLR7 у больных псориазом и псориатическим артритом. По результатам нашего исследования можно заключить, что аллель Т и гомозигота ТТ не только чаще встречаются у больных псориазом и псориатическим артритом по сравнению со здоровыми людьми, но и преобладают у больных псориатическим артритом, т.е. гомозиготное носительство ТТ предрасполагает к более тяжёлому течению псориаза и определяет более частый запуск синовиального воспаления в суставах.

Обсуждение основного результата исследования

Как известно, активированный TLR7 может стимулировать дендритные клетки и макрофаги, приводя к высвобождению из них провоспалительных цитокинов (TNF-α, IL-6), которые стимулируют кератиноциты к пролиферации и ускоренной дифференцировке [6–8]. Активация TLR7 может способствовать также запуску воспаления в суставах через активацию синовиальных макрофагов и дендритных клеток, что в результате приводит к высвобождению провоспалительных цитокинов, которые могут стимулировать воспаление в суставах и приводить к повреждению суставной ткани [9]. Таким образом, активация TLR7 играет важную роль при возникновении и обострении псориатического процесса.

В последнее время изучается роль рецептора TLR7 при различных инфекционных и иммуноопосредованных заболеваниях, таких как гепатит С, ВИЧ-инфекция, системная красная волчанка, бронхиальная астма и др. [18, 20]. В работе Э.С. Галимовой и соавт. [7] показано, что полиморфный вариант rs179008 гена TLR7 достоверно коррелирует с риском возникновения псориаза. В частности, носительство аллеля Т (rs179008) гена TLR7 достоверно повышает риск развития заболевания и предрасполагает к позднему началу развития кожного процесса. Данные же об ассоциации полиморфного маркера rs179009 гена TLR7 с псориазом и псориатическим артритом в литературе на сегодняшний день отсутствуют.

При анализе встречаемости полиморфного маркера rs179009 гена TLR7 в зависимости от степени тяжести кожного процесса у больных псориазом нами обнаружена значимая ассоциация наличия гомозигот СС и ТТ с тяжёлым течением кожного процесса. Так, гетерозиготное носительство СТ предрасполагало к лёгкому течению псориаза с формированием тяжести псориатических поражений, соответствующих PASI <10. Гомозиготное же носительство СС и ТТ, наоборот, являлось значимым маркером развития среднетяжёлой и тяжёлой степени тяжести псориаза с формированием тяжести псориатических поражений, соответствующих PASI >10.

Оценка ассоциации аллелей и полиморфизмов гена TLR7 с возрастом дебюта псориаза показала, что с поздним дебютом псориаза (после 40 лет) статистически значимо ассоциированы аллель С и генотип СС, в то время как наличие аллеля Т или гомозиготы ТТ статистически значимо предрасполагает к раннему дебюту кожного процесса (до 40 лет). Анализ зависимости различных аллелей и генотипов полиморфного маркера rs179009 в гене TLR7 у больных с возрастом дебюта псориатического артрита показал сходные корреляции. Так, гомозигота ТТ чаще встречалась у больных с ранним развитием артрита (до 40 лет), гомозигота СС и гетерозигота СТ ― значимо чаще у больных псориазом с поздним присоединением суставной симптоматики (после 40 лет).

Таким образом, в нашем исследовании впервые установлена ассоциация полиморфного варианта rs179009 гена TLR7 с псориатическим артритом у больных псориазом, а также определены генотипы, коррелирующие с ранним дебютом псориаза и псориатического артрита, а также с тяжёлым течением кожного процесса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Описанные иммунологические закономерности объясняют значимость генов TLR7, локализованных на Х-хромосоме, при псориазе и вносят вклад в понимание этиопатогенеза данного заболевания. Обнаруженная в результате настоящей работы ассоциация некоторых аллелей и генотипов TLR7 rs179009 с предрасположенностью к более раннему и тяжёлому течению псориаза дополняет представление о роли TLRs при псориазе и псориатическом артрите и может лежать в основе разработки диагностических алгоритмов, направленных на прогнозирование развития и раннюю диагностику псориатического артрита у больных псориазом, в том числе способствовать своевременной коррекции лечения у таких пациентов.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Источник финансирования. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при подготовке рукописи.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией). Наибольший вклад распределён следующим образом: Н.В. Баткаева ― написание статьи, обзор литературы, статистическая обработка, анализ групп исследования; М.М. Гитинова ― проведение методик исследования аллелей и генотипов TLR7 rs179009 в лаборатории (полимеразная цепная реакция), анализ групп исследования, интерпретация и оценка полученных результатов; О.Ю. Олисова ― критический анализ исследования, наблюдение за больными псориазом и псориатическим артритом, анализ групп исследования, редактирование статьи.

Об авторах

Надежда Владимировна Баткаева

Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы

Автор, ответственный за переписку.
Email: nbatkaeva.derm@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-8350-5842
SPIN-код: 5884-1750
ResearcherId: A-4704-2017

канд. мед. наук, доцент

Россия, Москва

Ольга Юрьевна Олисова

Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский Университет)

Email: olisovaolga@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-2482-1754
SPIN-код: 2500-7989

д-р мед. наук, профессор, чл.-корр. РАН

Россия, Москва

Муслимат Магомедовна Гитинова

Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы

Email: skarletgm@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0670-0967
SPIN-код: 9591-5531
Россия, Москва

Список литературы

Дополнительные файлы